NHS活化磁珠（QYM4007）

NHS活化磁珠是一种表面修饰有N-羟基琥珀酰亚胺（N-Hydroxysuccinimide, NHS）官能团的预活化聚合物磁性微球。该磁珠能够与含有伯氨基（-NH₂）的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子通过形成稳定的酰胺键实现共价偶联。

与传统羧基磁珠或氨基磁珠不同，NHS活化磁珠无需使用EDC/NHS或戊二醛进行预先活化，只需将含伯氨基的生物配体溶解于偶联缓冲液中，与磁珠孵育2-4小时即可完成偶联，操作简便、条件温和。

 

主要参数

产品名称：NHS活化磁珠；NHS-Activated MagBeads

货号：QYM4007	基质：聚合物磁性微球
平均粒径：1μm	配基：N-羟基琥珀酰亚胺
浓度：10mg/ml	保存条件：2-8℃
保存液：100%异丙醇	保质期：1年

 

应用方向

NHS活化磁珠适用于将含伯氨基的生物分子（蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等）共价固定于磁珠表面，制备的磁珠偶联物可广泛应用于以下场景：

1. 免疫沉淀（IP）与免疫共沉淀（Co-IP）

将特异性抗体偶联于磁珠，用于从复杂样品中高效、特异性捕获目标蛋白及其互作蛋白。由于抗体通过共价键固定，洗脱产物中不含抗体轻链/重链污染，可有效避免对后续Western blot或质谱分析的干扰。

3. 蛋白/抗体分离纯化

偶联特定亲和配体（如Protein A/G、抗原、受体等），从血清、腹水或细胞培养上清中一步纯化目标蛋白或抗体亚型。

4. 细胞分选

将针对细胞表面标志物的抗体偶联至磁珠，通过磁性分离从混合细胞群体中富集特定细胞亚群。

5. DNA-蛋白质相互作用研究

将DNA结合蛋白或特定核酸序列偶联至磁珠，用于pull-down实验、转录因子分析等。

 

 

使用方法

（一）缓冲液配制

所用水和缓冲液在使用前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤

1. 清洗液：1mM HCl

2. 偶联液：0.2M NaHCO3，0.5M NaCl，pH8.0

3. 封闭液：0.5M 乙醇胺，0.5M NaCl，pH8.3或 0.1M Tris-HCl，pH8.5

4. 清洗液1：0.1M乙酸-乙酸钠，0.5M NaCl，pH4.0

5. 清洗液2：0.1M Tris-HCl，0.5M NaCl，pH8.0

6. 保护液：含20%乙醇的1×PBS

注：偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度的盐离子减少非特异性吸附。

（二）样品制备

样品用偶联液溶解，浓度约为5-10mg/ml。

（三）偶联

1. 将磁珠混合液在涡旋仪上振荡，充分混匀。取500µl NHS活化磁珠混合液（100μl磁珠）于离心管中。

2. 将离心管置于磁力架上约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液。注：不要吸到磁珠。

3. 将离心管从磁力架上取下来，加入500µl 的清洗液，使用枪头反复吹打5-10 次，将离心管置于磁力架上，大约1min，待溶液变澄清后，用移液器吸弃清液，重复洗涤1次。

4. 加入500µl的偶联液，混合均匀，注：活化磁珠不能在偶联液中时间过长以免水解。

5. 将准备好的样品加入清洗好的NHS活化磁珠中，磁珠：样品溶液体积比约为1：1-2。

6. 28℃振荡反应2-4h或4℃过夜。注：确保磁珠反应过程中悬浮起来，否则会大大影响偶联效率。

7. 反应完后收集偶联样品，以便检测偶联效率。去离子水清洗磁珠，加入2倍磁珠体积的封闭液，28℃振荡反应1h。如果样品反应过夜则不需要封闭。将离心管置于磁分离器上，快速吸弃上清液。

注：偶联后无法用紫外吸收测定上清蛋白浓度，建议用电泳或BCA定量法检测偶联效率。

8. 用500µl的去离子水清洗磁珠，吸弃上清。清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复洗 2 次，然后保存在500µl的保护液中，于 2℃-8℃保存。

 

 

 

注意事项

1. 避免伯胺干扰：偶联缓冲液及样品中不能含有Tris、甘氨酸、BSA、明胶等含伯氨基的物质，它们会与目标配体竞争偶联位点。样品如含有上述成分，需通过脱盐或透析去除。

2. 配体浓度要求：推荐用于偶联的抗体/蛋白浓度＞1 mg/ml，浓度过低会降低偶联效率。