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His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(非变性)
His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(非变性)
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His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒(非变性)
市场价格
经销商客户: ¥220.0
实验室客户: ¥300.0
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商品描述

商品属性

可溶性蛋白纯化(His-标签,Ni-NTA柱法)试剂盒(非变性)

名称:可溶性蛋白纯化(His-标签,Ni-NTA柱法)试剂盒(非变性)

英文名称:His-labeled protein Purification (NI-NTA column) kit(Native)

目录号:QYP1062

保存条件:室温(15-25℃),4℃

保质期:1年

包含试剂:

名称

英文名称

规格

规格

保存条件

His-标签蛋白纯化亲和层析预装柱

His- label protein purification filler

1ml

5ml

4

平衡液

Balance Buffer

>50ml

>200ml

室温

洗涤液

Wash Buffer

>10ml

>50ml

室温

洗脱液

Elution Buffer

>10ml

>50ml

室温

赠送凝胶保护液1瓶(约100ml,20%PBS乙醇溶液,4

产品介绍:

His-标签蛋白纯化(Ni-NTA柱法)试剂盒用于实验室的His标签融合蛋白纯化。本试剂盒预装柱,我们已经给填装好,客户可直接使用。

表达菌株经IPTG诱导表达蛋白、超声破碎、离心分离后的上清,流经His-标签蛋白纯化填料柱,样本中的His标签蛋白与纯化填料特异性结合,其他杂蛋白则不与柱子结合。样本经洗涤液洗涤除杂后,加入洗脱液,洗脱His标签蛋白。单次蛋白纯化得率因蛋白种类、蛋白分子量大小而异。每根Ni-NTA琼脂糖凝胶柱可反复使用8-10次,其His标签蛋白结合效率不会显著降低。

    本试剂盒中的His-标签蛋白纯化填料可兼容8M尿素和6M盐酸胍,亦可进行包涵体蛋白纯化。如需进行包涵体蛋白纯化,请购买

包涵体蛋白纯化(His-标签,Ni-NTA柱法)试剂盒(变性)(QYP1063)。如需蛋白纯化试剂补充,请购买可溶蛋白纯化(His-标签,Ni-NTA柱法)试剂盒(非变性)补充装(QYP1064)。

实验例:

实验名称:可溶性His-标签蛋白纯化

I. 大肠杆菌中可溶性His标签蛋白的诱导表达

1. 挑取表达菌株单克隆,接种到5ml含抗生素的LB培养基中,培养过夜。

2. 按照1:50-1:100的比例,取培养过夜的菌液,接种到100ml含抗生素的LB培养基中。

3. 将菌液在37℃恒温摇床震荡培养1h左右,至菌液的OD600达到0.8-1.0。

4. 加入1mM IPTG,继续培养4-5h。

5. 收集菌液至离心管中,4000g离心10min,弃上清,收集菌体,-20℃或-80℃冻存备用。

注:可在诱导表达前取出少量菌液,不加IPTG,同样培养4-5h后作为未诱导的对照。对于特定蛋白的诱导表达,需通过实验确定最佳的IPTG浓度、诱导温度、诱导时间。

II. 菌体的超声破碎

将菌体解冻,加入10ml PBS,吹打混匀,充分重悬菌体。可在混悬液中添加IPTG及蛋白酶抑制剂。将菌体混悬液置于冰水混合物中,放入超声破碎仪,使探头浸入菌体混悬液液面下。将超声破碎仪调节至功率200-300w,工作10s,间隔10s,共6个循环。开始超声。

P.S. 因不同实验室超声破碎仪型号、探头大小、裂解菌体量不同,上述实验条件仅供参考。客户需自行优化最适实验条件。如超声后菌液依然非常浑浊,应适当增加功率,延长超声时间。

超声破碎结束后,10000g, 4℃离心20min。将上清与沉淀分开保存。SDS-PAGE电泳检测。确定蛋白是可溶性(上清)表达还是包涵体(沉淀)表达。

 III.His蛋白的非变性纯化

1. 装柱:将His-标签蛋白纯化填料混匀。将下层筛板置于层析柱空柱底部。用剪开枪头尖的1ml枪头吸取2ml His-标签蛋白纯化填料混悬液,加入层析柱空柱。待液体流出后(柱床体积1ml),向层析柱中加入PBS,将上层筛板置于层析柱顶部,小心向下推直到接触凝胶表面,压实。筛板和凝胶层之间不要有气泡。

2. 平衡:用平衡液洗柱子10个柱床体积。

3. 加样:将上清上柱。接住流穿液,反复上柱2-3次,使His标签蛋白与蛋白纯化填料充分结合。

P.S.上清必须保持澄清,不能含有任何不可溶杂质。否则会堵柱子,影响纯化获得蛋白的纯度。若杂质较多,可10000g,4℃,10min离心1-2次,经滤纸过滤,再经0.45um滤器过滤。

5. 洗涤:用洗涤液洗柱子10个柱床体积。

6. 洗脱:用洗脱液洗脱目的蛋白5-10个柱床体积。将样本收集到1.5ml或2ml EP管中。

7. 再生:用平衡液洗柱子10个柱床体积。

8. 保存:使用后的柱子应加入20%乙醇-PBS,盖上上下盖,直立保存在4℃。

9. 洗脱下来的蛋白可用BCA 蛋白定量试剂盒和SDS-PAGE电泳鉴定其浓度和纯度。

 

实验结果举例:见主图 

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