His-标签蛋白纯化填料层析柱（预装重力柱）

 

名称： His-标签蛋白纯化填料层析柱（预装重力柱）

英文名称：His- tag protein purification packing chromatography column

目录号：QYP1061

规格：1ml, 2ml,10ml

储存形式：预装柱

保护液：20%乙醇-PBS

储存温度：4℃

 

产品介绍：

 His-标签蛋白纯化填料是用于纯化6×His-tag重组蛋白的一种纯化介质，是由4% agarose 偶联了一种四齿螯合剂NTA所得。本试剂可用于在变性或非变性条件下纯化任何系统表达的6×His-tag重组蛋白。与同类型产品Ni-NDA相比，Ni-NTA中Ni²⁺有4个共价键与NTA结合，Ni-IDA中只有3个共价键。这种强结合力使得Ni-NTA中Ni的脱落率很低，与Ni-IDA相比更加稳定。本试剂可以耐受一定浓度的变性剂、还原剂、耦合剂等苛刻条件，是实验室纯化His-tag重组蛋白所采用的最常用填料之一。

产品性能：

性能	指标
基质	4%琼脂糖凝胶
配体	Ni-NTA
配体密度	20-40 μmol/mL
蛋白质载量	≥10 mg/ml His-标签蛋白
耐反压	0.1MPa
粒径范围	60 ~ 180μm
工作温度	4 ~ 40℃
基质pH稳定性	3 ~ 10（长时间）；2 ~ 11（短时间）

实验例：

实验名称：可溶性表达蛋白纯化

试剂及耗材准备：

超声破碎上清

His-标签蛋白纯化填料层析柱（柱体积12ml/柱床体积2ml）

裂解液：1×PBS

洗涤液：50mM NaH₂PO₄, 300mM NaCl, 20mM imidazole, pH8.0

洗脱液：50mM NaH₂PO₄, 300mM NaCl, 250mM imidazole, pH8.0

 

实验方案：

1. 平衡：向层析柱中加入10倍柱床体积的裂解液，（柱床体积2ml，加裂解液20ml）清洗柱子。

2. 上柱：将超声破碎上清加入层析柱。用离心管接住流穿液，反复上柱3次，使样本中的His-重组蛋白与蛋白纯化填料充分

3. 洗涤：向层析柱中加入10倍柱床体积的洗涤液，清洗柱子，除去非特异性结合的杂蛋白。

4. 洗脱：向层析柱中加入10ml洗脱液，洗脱目的蛋白。用离心管接住流出的目的蛋白。

5. 再生：向层析柱中加入10倍柱床体积的裂解液，清洗柱子。加入10ml含20%乙醇的PBS，盖上上下盖，将层析柱直立放于4℃保存。