Ni-NTA Agarose 6FF（His-标签蛋白纯化填料）
名称：Ni-NTA Agarose 6FF；His-标签蛋白纯化填料；Ni偶联琼脂糖珠
英文名称：His- label protein purification filler
目录号：QYP1060
规格：10ml, 20ml，其他规格
储存形式：50%蛋白纯化填料混悬液
保护液：20%乙醇-PBS
储存温度：4℃
1产品介绍：
金属螯合亲和色谱，又称固定金属离子亲和色谱，其原理是利用蛋白质表面的一些氨基酸，如组氨酸能与多种过渡金属离子Cu2+，Zn2+，Ni2+，Co2+，Fe3+发生特殊的相互作用，利用这个原理可以把富含这类氨基酸的蛋白质吸附，从而达到分离的目的。由于这个原因，偶联这些金属离子的琼脂糖凝胶就能够选择性地分离出这些含有多个组氨酸的蛋白以及对金属离子有吸附作用的多肽、蛋白和核苷酸。半胱氨酸和色氨酸也能与固定金属离子结合，但这种结合力要远小于组氨酸残基与金属离子的结合力。His-标签蛋白纯化填料是用于纯化6×His-tag重组蛋白的一种纯化介质，是由6% agarose 偶联了一种四齿螯合剂NTA所得。
镍琼脂糖凝胶FF可用于在变性或非变性条件下纯化任何系统表达的6×His-tag重组蛋白。本试剂具有更高的载量，批次重复性好，使用寿命长。已经螯合好镍离子，使用更方便，颗粒粒度均匀，粒径小，分离效果好。凝胶可以耐受一定浓度的变性剂、还原剂、耦合剂等苛刻条件，物理和化学稳定性好，是实验室纯化His-tag重组蛋白所采用的最常用填料之一。
2技术指标：
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外观
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淡蓝色半透明凝胶
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基质
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6%琼脂糖凝胶
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配体
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Ni-NTA
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配体密度
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50 μmol/mL
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蛋白质载量
最大流速
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≥50 mg/ml His-标签蛋白
300cm/h
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耐反压
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0.1MPa
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粒径范围
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45 ~ 165μm
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工作温度
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4 ~ 40℃
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基质pH稳定性
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3 ~ 10（长时间）；2 ~ 11（短时间）
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3适用范围：分离能被金属离子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及带His 标签的重组蛋白。
4实验方案：
1. 装柱：将His-标签蛋白纯化填料混匀。将下层筛板置于层析柱空柱底部。用剪开枪头尖的1ml枪头吸取4ml His-标签蛋白纯化填料混悬液，加入层析柱空柱。待液体流出后（柱床体积2ml），向层析柱中加入PBS，将上层筛板置于层析柱顶部，小心向下推直到接触填料表面，压实。筛板和填料层之间不要有气泡。
2. 平衡：向层析柱中加入10倍柱床体积的平衡液，（柱床体积2ml，加平衡液20ml）清洗柱子。
3. 上柱：将超声破碎上清(或包涵体溶液)加入层析柱。用离心管接住流穿液，反复上柱3次，使样本中的His-重组蛋白与纯化填料充分结合。
4. 洗涤：向层析柱中加入10倍柱床体积的洗涤液，清洗柱子，除去非特异性结合的杂蛋白。
5. 洗脱：向层析柱中加入10ml洗脱液，洗脱目的蛋白。用离心管接住流出的目的蛋白。
6. 再生：向层析柱中加入10倍柱床体积的裂解液，清洗柱子。加入10ml含20%乙醇的PBS，盖上上下盖，将层析柱直立放于4℃保存。
