聚合物羧基磁珠(QYM4006)
聚合物羧基磁珠,核心结构为Fe₃O₄超顺磁核,外壳为聚合物。磁珠表面富含羧基(-COOH)官能团,可在EDC/NHS等活化剂作用下,与含伯胺基(-NH₂)的蛋白、抗体、多肽、寡聚核苷酸等生物配体共价偶联形成稳定的酰胺键。
本产品通过细乳液聚合法制备,聚合物壳层与磁核以化学键连接,确保了壳层的稳定性和官能团的高密度分布,兼具超顺磁性、快速磁响应性和良好的分散性,是医学与分子生物学研究中理想的固相载体工具。
主要参数
产品名称:聚合物羧基磁珠;羧基磁珠;Mag COOH
货号:QYM4006
内核:Fe3O4
平均粒径:2μm
壳层材质:聚合物
浓度:10mg/ml
保存条件:2-8℃,可在室温运输或短暂保存
保存液:20%乙醇PBS溶液
保质期:2年
产品性能
1. 超顺磁性:磁核为Fe₃O₄,无外加磁场时无剩磁,磁珠在溶液中可均匀分散;外加磁场时可快速富集,便于分离和洗涤操作。
2. 化学稳定接枝:聚合物壳层通过KH-570硅烷偶联剂以化学键方式接枝于磁核表面,相较于物理包覆,壳层不易脱落,使用稳定性更高。
3. 高羧基密度:通过引入甲基丙烯酸(MAA)共聚单体,可在表面提供丰富的羧基位点,保障对生物配体的高载量偶联。
4. 良好分散性与低非特异性吸附:聚合物壳层的亲水化修饰使磁珠在水中及常见缓冲液中分散良好,非特异性吸附低。
应用方向
1. 蛋白纯化:偶联抗体或亲和配体,用于目标蛋白的亲和捕获与纯化。
2. 细胞分选:偶联特定细胞表面标志物抗体,实现目标细胞的正选或负选。
3. 特异性核酸分离:偶联寡核苷酸探针(需5’-氨基修饰),用于杂交捕获他特定DNA/RNA序列
磁珠与生物分子的偶联方法(仅供参考,以蛋白A为例)
A.磁珠表面羧基活化
1. 混匀磁珠后,取100 µL 羧基磁珠到1 mL离心管中,磁性分离去除上清液,用200 µL MEST溶液(100 mM MES,pH 5.0,0.05% Tween 20)进行磁性分离洗涤2次,然后移除上清液;
2. 迅速加入新鲜配制的 100 µL EDC溶液(10 mg/mL,以上述MEST溶液作分散剂)和100 µL NHS(10 mg/mL,以上述MEST溶液作分散剂)溶液到装有磁珠的离心管中,漩涡混匀使磁珠充分悬浮,25℃活化30 min,该期间保持磁珠的悬浮状态(可利用垂直混合仪进行颠倒混匀);经过上述步骤之后,磁珠表面的羧基已经活化,可以与带有伯氨基的生物配体进行共价偶联。(活化状态不宜长时间保存,建议立即进行偶联)
B.磁珠与生物配体的共价偶联
1. 磁性分离去除上清液,加入50 µg~200 µg 生物配体(用量、浓度及缓冲液类型需要根据具体实验进行优化,配体缓冲液可参考如下几种:100 mM 2-吗啉乙磺酸缓冲液,pH 4.8;200 mM 碳酸氢钠缓冲液,pH 8.3;50 mM 硼酸盐缓冲液,pH8.5;100 mM 磷酸盐缓冲液;100 mM 氯化钠溶液,pH 7.4等。缓冲液中可加入0.05% Tween 20以提高磁珠分散性,避免缓冲体系中存在除生物配体以外含有伯氨基的试剂),轻柔地混匀;
2. 25℃偶联2 h,或25℃偶联1 h后放置4℃ 静置过夜,偶联期间保持磁珠的悬浮状态(可利用垂直混合仪进行颠倒混匀);
3. 离心管置于磁性分离架上磁性分离去除上清液,加入200 µL PBST溶液(pH 7.2,且含1%BSA)重悬磁珠(可根据需要进行超声),25℃反应1 h封闭磁珠表面未反应的活化羧基基团,该期间保持磁珠的悬浮状态(可利用垂直混合仪进行颠倒混匀);
4. 离心管置于磁性分离器上磁性分离去除上清液,每次用200 µL PBS溶液(pH 7.2)或保存溶液洗涤3次后,重新悬浮于保存溶液中(可根据需要来确定保存溶液的加入量,以调整偶联配体磁珠的浓度),保存于4℃。如果固定的生物配体稳定,可以在保存溶液中加入0.02%(W/V)叠氮化钠(NaN3)作为抑菌剂。
注意事项
1. 冷冻、干燥和离心等操作会引起磁珠团聚,不易于重悬和分散,并且影响磁珠表面功能基团的化学活性。
2. 在使用本产品前,请务必充分振荡或超声使磁珠呈均匀的悬浮状态。
3. 使用过程中可根据需求,用纯化水或缓冲液洗涤磁珠 2~3次,以去除保存液中乙醇。
4. 本产品需与磁性分离设备配套使用。
5. 为保证最佳的实验结果,请选用合适的配体进行共价偶联反应。
6. 本产品仅供研究使用。
注:本产品仅用于科研用途,不用于诊断和治疗。
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