DH5α感受态细胞  DH5α Chemically Competent Cell 

产品组成： DH5α Competent Cell 100 μL/支

保存条件（保质期）： -80℃（6 个月）

基因型： F-φ80 lacZΔM15Δ(lacZYA-argF) U169 endA1 recA1 hsdR17 (rk - ,mk + )sup E44λ-thi-1 gyrA96 relA1 phoA

产品说明： DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入 DNA 的稳定性；lacZΔM15 的存在使 DH5α 可用于蓝、白斑筛选。

使用方法：

A 常规转化流程

1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置 25 min。注意：所使用 DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的 1/10，100 μL 感受态细胞能够被 1 ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和。

2. 42℃水浴热激 45 s，迅速放回冰中并静置 2 min，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 700 μL 不含抗生素的无菌培养基(2YT 或 LB)，37℃，200 rpm 复苏 60 min。

4. 5000 rpm 离心 1 min 收菌，留取 100 μL 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或 LB 培养基上。

B 快速转化流程（一）

 1. 提前 15 min 将平板放入 37℃培养箱预热。

 2. 将感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰上静置 ≥ 5 min。

3. 将 EP 管中感受态—DNA 混合物转移到提前预热的平板中，用玻璃珠或涂布棒涂布均匀。 4. 将平板倒置于 37℃培养箱过夜培养。（该快转方法一的转化效率约为正常转化流程的 20%-30%，pUC19 的转化效率 ≥ 2×109 cfu/μg）

C 快速转化流程（二）

1. 将感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰上静置 5 min。

2. 42℃水浴热激 45 s – 60 s，迅速放回冰中并静置 2 min。

3. 将 EP 管中感受态—DNA 混合物转移到平板中，用玻璃珠或涂布棒涂布均匀。

4. 将平板倒置于 37℃培养箱过夜培养。（该快转方法二的转化效率约为正常转化流程的 30%-40%，pUC19 的转化效率 ≥ 3×109 cfu/μg）

注意事项：

1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中 8 min 内加入目标 DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。 同时转化多支感受态时，应在半小时内完成操作。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。