正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。UE活性与有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关，反应了氮素状况。
测定原理：
利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、甲苯（不允许快递）和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：粉剂×1瓶，临用前加入9mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；
试剂二：液体22mL×1瓶，4℃保存；
试剂三A液：液体×1支，4℃保存；试剂三B液：液体×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂四：液体2mL×1瓶，4℃保存；
样本的前处理：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至578nm，蒸馏水调零。
2、酶促反应
混匀，放入37℃水浴1h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。
试剂名称
测定管
对照管
样本（μL）
20
20
试剂一（μL）
90
蒸馏水（μL）
90
试剂二（μL）
190
190
2、将上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。
3、测氨量（在微量石英比色皿或96孔板中加入下列试剂）
测定管
对照管
稀释后的上清液（μL）
80
80
试剂三（μL）
15
15
试剂四（μL）
15
15
蒸馏水（μL）
90
90
充分混匀，室温放置20min
混匀，于578nm处，蒸馏水调零，读吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
UE活力计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。
1、血清（浆）UE活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷V样÷T=27.32×(ΔA -0.0373)
单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/ g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =27.32×(ΔA -0.0373) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.0546×ΔA
10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V反总：反应体系总体积：0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.04575x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值A。
1、血清（浆）UE活力的计算:
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/mL）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷V样÷T=54.64×(ΔA -0.0373)
单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
2、组织、细菌或细胞中1μg NH3-N活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/mg prot）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(V样×Cpr)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/g 鲜重）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T =54.64×(ΔA -0.0373) ÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。
UE活力（μg/min/104 cell）＝(ΔA-0.0373) ÷0.04575×10×V反总÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.1092×ΔA
10：稀释倍数；T：反应时间，60min； V反总：反应体系总体积：0.3mL；V样：加入反应体系中样本体积，0.02mL；V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量， g；500：细菌或细胞总数，500万。
