注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

木质素是构成植物细胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇构成的一类物质，存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间，起抗压作用。

测定原理

木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰，280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。

需自备的仪器和用品、

天平、40目筛，玻璃试管、烧杯、离心机，恒温水浴锅、封口膜、烘箱、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、高氯酸，浓硫酸。

试剂组成和配制

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体100mL×1瓶，4℃保存。

样品处理

样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛，称取约2mg（记为W）于10mL玻璃试管中（务必用玻璃试管，不可用Ep管）

测定操作表

	空白管	测定管
样本（mg）		2
试剂一（μL）	500	500
高氯酸（μL）	20	20
于10mL玻璃试管中，用封口膜密封，充分混匀，80℃水浴40min，每隔10min震荡一次，然后自然冷却
试剂二（μL）	500	500
充分混匀
上清（μL）	20	20
试剂三（μL）	980（参照注意事项四）	980（参照注意事项四）
取200μL于微量石英比色皿/96孔板，测定280nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管，ΔA=A测定管-A空白管

计算公式

标准曲线：y = 0.0347x+0.0068，R2=0.9889

Lignin（mg/g干重）= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反总×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50

V反总：反应总体积：1.02mL；W：样本质量，g；T：稀释倍数

注意事项

试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。

加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。

试剂三具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱子操作。

取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度，试剂三的用量可调整，保证吸光值在0.1-0.8之间即可，并在公式中参与计算。