注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

铁元素是一种十分重要的植物营养元素，土壤中铁含量直接影响着植物吸收利用以及生长代谢。

测定原理

在pH2-9范围内，盐酸羟胺将三价铁转化为二价铁，与邻菲罗琳反应生成橙红色配合物，在510nm有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制

提取剂：粉剂×1瓶，4℃保存。

提取液：液体100mL×4瓶，4℃保存。

试剂一：液体2mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体4mL×1瓶，4℃避光保存。

样本处理

新鲜土样风干，过100目筛，按照土壤质量（g）：提取剂质量(g)为1：4的比例（建议称取约0.1g土样，加入0.4g提取剂）缓慢加入提取剂于坩埚中，边加边搅拌均匀，然后在马弗炉中550℃熔融10min，然后在920℃熔融30min，趁热取出坩埚，将熔融物转入烧杯，边搅拌边加4mL提取液，必要时加盖，从烧杯口加入，防止溶液溅出，溶解30min后，5000g ，25℃离心10min，取上清液待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本（μL）		20
试剂一（μL）	20	20
试剂二（μL）	60	60
试剂三（μL）	40	40
H2O（μL）	80	60
充分混匀，25℃静置20min
于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定510nm处吸光值A，分别记为A空白管和A测定管，△A=A测定管-A空白管

计算公式

用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.1569x -0.0173，R2 = 0.9992

全铁含量（mg/kg）=（△A+0.0173）÷ 0.1569×V反总÷（W×V样÷V样总）

= 254.94×（△A+0.0173）÷W

V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，4mL，W：样本质量，g

用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 0.0785x -0.0173，R2 = 0.9992

全铁含量（mg/kg）=（△A+0.0173）÷ 0.0785×V反总÷（W×V样÷V样总）

= 509.55×（△A+0.0173）÷W

V反总：反应总体积，0.2mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V样总：加入提取液体积，4mL，W：样本质量，g