正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

S-UE能够水解尿素，产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。

测定原理：

利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、甲苯（不允许快递）。

试剂的组成和配制：

试剂一：甲苯10mL×1瓶，4℃保存；（自备）

试剂二：粉剂×1瓶，临用前加入20mL蒸馏水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的试剂4℃保存；

试剂三：液体65mL×1瓶，4℃保存；

试剂四A液：液体1mL×1瓶，4℃保存；试剂四B液：液体4mL×1瓶，4℃保存；临用前将A液倒入B液中混合，待用；用不完的试剂4℃保存一周；

试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；

样品处理：

新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。

测定步骤：

1 、培养

振荡混匀，室温放置15min

混匀，放入37℃水浴培养24h后，10000g 25℃离心10min，取上清液。

2、将培养结束的上清液稀释10倍（取0.1mL上清液，加入0.9mL蒸馏水）。

	测定管	对照管
风干土样(g)	0.25	0.25
试剂一（μL）	125	125

试剂二（μL）	625
蒸馏水（μL）		625
试剂三（μL）	1250	1250

3、测氨量

充分混匀，室温放置20min

	测定管	对照管
稀释后的上清液（μL）	400	400
试剂四（μL）	80	80
试剂五（μL）	60	60

蒸馏水（μL）

460

460

混匀， 578nm处蒸馏水调零，测A值，ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

脲酶活力计算

标准条件下测定的回归方程为y = 0.0915x +0.0373；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

单位的定义：每天每g土样中产生1μg NH3-N定义为一个酶活力单位。

脲酶活力（μg/d /g 土样）＝(ΔA-0.0373) ÷0.0915×10×V反总÷W÷T =874×(ΔA -0.0373)

10：稀释倍数；T：反应时间，1d； V反总：反应体系总体积：2mL；W：样本质量，0.25g。