注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为抗真菌病害的研究热点。

测定原理

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在585nm处有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿，甲苯、蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体50mL×1瓶，4℃避光保存。

样品处理

新鲜土样风干，过30-50目筛。

测定操作表

	对照管	测定管
土样（g）	0.2	0.2
甲苯（μL）	30	30
混匀，25℃静置15min
蒸馏水（μL）	200
试剂一（μL）		200
混匀，37℃培养24h
蒸馏水（μL）	400	400
4000rpm，4℃，离心10min，取上清300μL于新的EP管中
试剂二（μL）	30	30
混匀，沸水浴5min
试剂三（μL）	900	900
混匀，37℃显色20min，取1mL于1mL玻璃比色皿中，蒸馏水调零，测定585nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，ΔA=A测定管-A对照管。

计算公式

标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R2=0.9989；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸光值ΔA。

酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V反总÷W÷T×1000

= 598×（ΔA +0.0007）

V反总：反应体系总体积，0.63mL；W：样本质量，0.2g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL

注意事项

试剂一充分混匀后再使用。