中文名:金担子素A

英文名:Aureobasidin A

CAS:127785-64-2

分子量:1100

分子式:C60H92N8O11

纯度:≥95%

储存条件:2-8℃

产品简介

不溶于水，溶于甲醇、乙醇

一、关于AbA：

金担子素A（Aureobasidin A，AbA）是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素，具有很强的抗真菌能力。AbA作用机制是抑制酵母中AUR1基因（1,2）编码的肌醇磷酰胺（inositol phosphorylceramide，IPC）合成酶的活性，干扰鞘脂合成，从而杀死菌株。AbA在较低的浓度下（0.1-0.5 μg/ml）即可对酵母产生毒性。编码IPC合成酶的基因研究较多的来自酿酒酵母菌的AUR1基因，以及构巢曲霉的AURA基因，两者具有同源性。通过对编码AUR1-C基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性，作为蛋白质互作研究的报告基因。

因为AbA可以直接杀死敏感的酵母菌株，而不是延迟菌株生长，所以AbA筛选有利于阳性克隆的生长和识别。与营养报告基因（如HIS3）进行低严紧度初筛相比，AbA筛选大大消除了背景克隆。实际操作中，用AbA进行初筛时会获得更多克隆，之后再用4个报告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)进行高严紧度的二次筛选以验证阳性克隆。AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记；也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子，可以简化酵母双杂交文库筛选。

二、使用方法：

1.本品为AbA的甲醇溶液，浓度为1 mg/ml，直接用作储存液。

2.灭菌后YPD Agar培养基（PM2020）冷却至50-55 ℃，加入适量的AbA储液，倒板备用。（AbA工作浓度取决于宿主细胞的敏感度，见下表）

3.制备酵母感受态细胞并完成转化，参考SK2400，SK2401。

4.把100 μl完成转化酵母细胞悬液涂到含有适量AbA的YPD Agar培养基平板上，30℃培养2-4天。

5.挑取克隆鉴定，或统计转化效率。

三、不同菌株建议AbA的工作浓度：

菌株		MIC（µg/ml）
S.cerevisiae	ATCC9763（diploid）	0.2-0.4
	Baker’s yeast（diploid）	0.2-0.4
	Beer yeast（triploid or tetraploid）	0.1
	SH3328（haploid）	0.1
	Shochu yeast（diploid）	0.1
	Sake yeast（diploid）	0.1-0.2
C.albicans	TIMM-0136（diploid）	0.04
C.tropicalis	TIMM-0324（diploid）	0.08
Schizo.pombe	JY-745（monoploid）	0.1

四、对AbA敏感的真菌：

出牙酵母（Saccharomyces cerevisiae）、粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）、光滑念珠菌（Candida glabrata）、构巢曲霉（Aspergillus nidulans）和黑曲霉（A. niger.）。