DNase I (RNase free)
Cat. QYR035
包装量：1000U
浓度：2U/ul
体积：500ul
保存条件：-20℃
附带试剂：10×DNase I Buffer (1ml)
保存条件：-20℃
产品说明：
本酶是将单链或双链DNA同等程度的随机分解，生成具有5’-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。本酶已除去蛋白酶和核酸酶，从而提高了在pH中性区域的稳定性，适用于RNA的制备。
活性定义：
以小牛胸腺DNA为底物，在25℃，pH5.0的条件下，1分钟内使反应液的260nm吸光度增加0.001所需要的酶量，定义为一个活性单位（Kunitz Unit）
实验应用：
1. 用T7或SP6 RNA Polymerase进行体外转录（In vitro transcription）时，合成RNA后，不必更换Buffer，使用Recombinant DNase I（RNase-free）即可将模板DNA降解。
2. 与DNA Polymerase I一起用于切口平移。
3. 在Mn2+存在的条件下，为鸟枪法测序（Shotgun sequencing）制作DNA文库。
4. 用于足迹法（Foot-printing）分析DNA-蛋白质相互作用。
5. 在进行RT-PCR反应前，对基因组DNA进行降解。
使用注意：
本酶已除去蛋白酶，在最适中性pH范围内稳定。反应时需要二价金属离子参与，Mg2+存在时，能随机使双链DNA产生切口；Mn2+存在时，双链DNA的两条链被分解为片段。加入EDTA可使酶可逆性失活，75℃加热10分钟则不可逆性失活。
实验例：除去RT-PCR样品中的基因组DNA
1. 在微量离心管中配制下列反应液：
RNA 10ug
10X DNase I Buffer 10ul
DNase I (RNase-free) 1ul (2U)
RNase Inhibitor 20U
DEPC-treated water, up to 100ul
2. 37℃水浴反应10min.
3. 加入1ul 0.5M EDTA (EDTA浓度5mM).
4. 75℃水浴热灭活10min.
5.进行Agarose电泳确认是否除去基因组DNA，同时测定RNA的浓度。
P.S.也可使用酚-氯仿抽提法代替热灭活。
如果基因组DNA没有被完全除去，可以适当增加DNase I (RNase-free) 的添加量，或者延长反应时间。
