DNS 试剂（3,5-二硝基水杨酸试剂）

——用于还原糖的定量测定

有效期：6个月

储存条件:常温 避光 密封

试剂为澄清淡黄色液体，如变为深褐色或出现沉淀，请勿使用

 

产品简介：

DNS试剂（3,5-二硝基水杨酸试剂）是一种基于比色法的还原糖定量检测试剂。在碱性加热条件下，试剂中的3,5-二硝基水杨酸与还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖等）的游离羰基发生氧化还原反应，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在540 nm波长下，其吸光度与还原糖含量在0.1-1.5 mg/mL范围内呈良好的线性关系。本试剂广泛应用于生物化学、食品科学、发酵工程等领域的还原糖含量测定及相关酶（淀粉酶、糖化酶、纤维素酶等）活性分析。

 

主要成分：

3,5-二硝基水杨酸（DNS试剂的主成分）

氢氧化钠（提供强碱性反应环境）

酒石酸钾钠（关键成分，作为螯合剂，防止生成氢氧化铜沉淀，使显色稳定）

苯酚（还原剂，可增强显色灵敏度，也可用等量结晶苯酚）

无水亚硫酸钠（还原剂，保护试剂，防止其被空气中氧气氧化而失效）

使用方法：三步法测定流程

第一步：制作标准曲线

准备葡萄糖母液（1 mg/mL） → 稀释为系列浓度：

0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/mL

1. 取6支干净试管，编号0-5

2. 按下表加入试剂：

管号	葡萄糖液 (mL)	DNS试剂 (mL)	葡萄糖终浓度 (mg/mL)
0 (空白)	0 (用水代替)	1.0	0
1	0.2	1.0	0.2
2	0.4	1.0	0.4
3	0.6	1.0	0.6
4	0.8	1.0	0.8
5	1.0	1.0	1.0

3. 立即混匀，放入沸水浴加热10分钟

4. 取出后立即冰浴冷却5分钟或冷水冷却至室温

5. 每管加蒸馏水补足至10 mL，混匀

6. 在540 nm波长下，用空白管调零，测定各管吸光度

绘制标准曲线：

以葡萄糖浓度为横坐标（X），吸光度为纵坐标（Y）

得到线性方程：Y = aX + b （R²应 > 0.99）

第二步：测定样品

样品预处理：

液体样品：直接测定或适当稀释

固体样品：按标准方法提取后过滤

关键：确保样品浓度在标准曲线范围内（0.1-1.5 mg/mL）

测定操作：

1. 取1.0 mL样品液 + 1.0 mL DNS试剂
2. 沸水浴加热10分钟
3. 冷却，加水至10 mL
4. 测540 nm吸光度
5. 代入标准曲线方程计算浓度

公式：样品浓度 (mg/mL) = （样品吸光度 - b）/ a​

（如需计算原样浓度，乘以稀释倍数）

 

第三步：酶活测定应用示例（淀粉酶）

1. 反应体系：

酶液 + 淀粉底物 → 37°C反应10分钟

立即煮沸5分钟终止反应

2. 测定：

取1.0 mL反应液 + 1.0 mL DNS试剂

沸水浴10分钟 → 冷却 → 定容 → 测540 nm吸光度

3. 计算酶活：

酶活力 (U/mL) = (产生的葡萄糖mg数 × 1000) / (反应时间min × 酶液mL数)

注意事项 

沸水浴，严格计时10分钟,加热后立即冷却至室温, 样品:DNS = 1:1（体积）, 冷却后2小时内完成测定, 每个样品设自身空白.

结果异常排查

现象	可能原因	解决方案
吸光度太低	①加热不充分 ②DNS失效 ③糖浓度太低	①确保沸水浴10分钟 ②检查DNS颜色 ③浓缩或加大样品量
吸光度太高	糖浓度超出线性范围	稀释样品重测
标准曲线线性差	①加热时间不一致 ②移液不准 ③DNS变质	①统一加热时间 ②校准移液器 ③新配DNS
背景颜色深	样品本身有颜色	设样品空白扣除

常见问题

Q1：可以用其他糖做标准品吗？

A：可以，但建议使用与样品相同的糖类。葡萄糖最常用。不同糖的标准曲线斜率略有差异。

Q2：样品需要过滤吗？

A：是的。浑浊样品需过滤或离心，避免干扰吸光度测定。

Q3：能测定蔗糖吗？

A：不能直接测定。蔗糖需用酸或酶水解为葡萄糖和果糖后测定。

Q4：加热时间必须10分钟吗？

A：推荐10分钟，可在5-15分钟选择。但同一批实验必须统一时间。

Q5：结果重复性差怎么办？

 

A：检查：①加热时间是否一致 ②冷却是否充分 ③移液是否准确 ④样品是否混匀