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Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF是一种将Strep-Tactin键合在琼脂糖凝胶微球上形成的生物亲和层析分离介质，主要用于纯化Strep II标签蛋白。Strep II标签为8个氨基酸的小标签（WSHPQFEK），由于标签小，仅为1 kDa左右，一般不影响融合后蛋白质的结构和功能，常用于融合表达蛋白质的检测和纯化。

 

本产品的配基Strep-Tactin是链霉亲和素（Streptavidin）的突变体，与链霉亲和素相比，Strep-Tactin对Strep II标签的亲和能力至少强10倍以上，能够在温和的条件下与Strep II融合蛋白结合和解离。由于Strep-Tacin对Strep II标签具有高度特异性，一般一步纯化就能获得高纯度的蛋白质样品。

 

Strep II标签蛋白与凝胶结合后可使用脱硫生物素竞争方式进行洗脱，该洗脱方式比较温和，一般不会影响蛋白质的性质。如Strep II标签蛋白质能耐受碱性条件，也可用碱液洗脱，比如10 mM NaOH等。

Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF能耐受较高的碱性条件，可以用0.5 M NaOH进行再生清洗和去除热源等。

 

另外，2-(4-羟基苯唑)苯甲酸（HABA）也可用于凝胶再生，过量的HABA能以竞争的方式替换脱硫生物素，但在无HABA的缓冲液中， Strep-Tactin与HABA会发生解离，从而使HABA脱落，实现再生。

使用方法：

1 推荐缓冲液

纯化Strep II标签蛋白

结合缓冲液：100 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，1 mM EDTA，pH 8.0；

 　　　　　　或20 mM NaH2PO4，280 mM NaCl，6 mM KCl，pH 7.4

 

洗脱缓冲液：结合缓冲液 + 2.5 mM 脱硫生物素；

 　　　　　　或10 mM NaOH

 

再生缓冲液：0.5 M NaOH；

 　　　　　　或结合缓冲液+1 mM HABA

 

2 样品准备

上柱的样品应尽量保持与结合缓冲液一致。通常可用透析、超滤、稀释等方法处理样品。并且上柱前应过0.45 μm滤膜或高速离心去除不溶物。

 

3 样品纯化

3.1 平衡：取适量的Strep-Tactin琼脂糖凝胶FF装入合适的层析柱中，用蒸馏水清洗5个柱体积去除保存液，再用结合缓冲液平衡5个柱体积，建议流速为100 cm/h。

3.2 上样：将准备好的样品上柱，建议流速为20 ~ 100 cm/h，可根据实际结合情况选择流速，能获得较好的效果。

3.3 再平衡：上样后用结合缓冲液平衡10个柱体积以上，或平衡至基线，洗去杂质，推荐流速为100 cm/h。

3.4 洗脱：用洗脱缓冲液洗10 ~ 20个柱体积，建议流速为100 cm/h，收集的洗脱液应立即调节pH至稳定范围，并根据需要置换缓冲液。

3.5 NaOH再生：洗脱目的蛋白后的柱子用蒸馏水清洗3 ~ 5个柱体积，并用0.5 M NaOH再生3 ~ 5个柱体积，再用蒸馏水清洗至中性，用20%乙醇保存柱子，或进行下一次纯化。

3.6 HABA再生：用脱硫生物素洗脱目的蛋白的，还可以用HABA缓冲液再生，一般用HABA的结合缓冲液洗15个柱体积，再用结合缓冲液洗30个柱体积，然后可以用20%乙醇保存柱子，或进行下一步纯化。HABA上柱后凝胶颜色会变为红橙色，在结合缓冲液平衡后会恢复正常的白色，这种再生方式一般使用体积会大些。