1. PBS，三乙醇胺缓冲液 (TBS) 和三乙醇胺 - 吐温 (TBS Tween) 缓冲液的配制
PBS (10x)
• 80g 氯化钠
• 2.0g 氯化钾
• 14.4g 磷酸氢二钠
• 2.4g 磷酸二氢钾
• 加入 800ml 超纯水，混匀，用纯盐酸调节 pH 值至 7.4，然后加入超纯水至 1L。
10 倍三乙醇胺缓冲液
• 24.23g 氨基丁三醇氯化氢
• 80.06g 氯化钠
• 加入 800ml 超纯水，混匀，用纯盐酸调节 pH 值至 7.6，然后加入超纯水至 1L。 三乙醇胺 - 吐温缓冲液（含 0.1% 的吐温 20）
配制 1L 溶液：取 100ml 10 倍三乙醇胺缓冲液加 890ml 超纯水，再加入 10ml 吐温 20 (10%)
吐温 20 很粘稠会粘在量取的枪头上，要确定加入三乙醇胺缓冲液的变性剂体积足够。建议使用 10% 的溶液进行配制，这样会比用未 稀释的吐温 20 溶液容易配制。
2. 蛋白质印迹
裂解液
这些缓冲液可保存于 4°C 几周，分装后冻存于 -20°C 可以保存一年。
乙基苯基聚乙二醇（NP-40）缓冲液
• 150mM 氯化钠
• 1.0% 乙基苯基聚乙二醇（也可用 0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚 (Triton X-100) 代替）
• 50mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢 (Tris-HCl) ，pH 值 8.0
• 蛋白酶抑制剂
RIPA 缓冲液（放射免疫沉淀测定缓冲液）
• 150mM 氯化钠
• 1.0% 乙基苯基聚乙二醇或 0.1% 聚乙二醇辛基苯基醚
• 0.5% 去氧胆酸钠
• 0.1% SDS（十二烷基硫酸钠）
• 50mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢，pH 值 8.0
• 蛋白酶抑制剂
RIPA 缓冲液的变性能力要强于乙基苯基聚乙二醇或聚乙二醇辛基苯基醚，因其活性成分包含了离子型去垢剂 SDS 和去氧胆酸钠，在 核膜降解和细胞核提取时非常有用。RIPA 缓冲液产生的背景很低，但其也可使蛋白酶变性。
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10% 的去氧胆酸钠储存液（5 克溶于 50ml）必须避光保存。 |
三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢缓冲液
• 20mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢，pH 值 7.5
• 蛋白酶抑制剂
三羟甲基氨基甲烷 - 聚乙二醇辛基苯基醚缓冲液（用于细胞骨架蛋 白）
• 10mM 三羟甲基氨基甲烷，pH 值 7.4
• 100mM 氯化钠
• 1mM 乙二胺四乙酸
• 1mM 乙二醇双 (2- 氨基乙醚 ) 四乙酸
• 1% 聚乙二醇辛基苯基醚
• 10% 甘油
• 0.1% 十二烷基硫酸钠
• 0.5% 去氧胆酸钠
• 蛋白酶抑制剂
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10% 的去氧胆酸钠储存液（5 克溶于 50ml）必须避光保存。 |
非变性裂解缓冲液
• 20mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢，pH 值 8.0
• 137mM 氯化钠
• 10% 甘油
• 1% 乙基苯基聚乙二醇 / 聚乙二醇辛基苯基醚
• 2mM 乙二胺四乙酸
• 蛋白酶抑制剂
用于可溶于变性剂的抗原，其天然型被相应抗体识别。聚乙二醇辛基苯基醚可替代乙基苯基聚乙二醇
无去垢剂型可溶蛋 白裂解液
• 5mM 乙二胺四乙酸
• 0.02% 叠氮化纳
• 磷酸盐缓冲液
• 蛋白酶抑制剂
一些可溶性蛋白不需要使用去垢剂。此缓冲液可用于机械裂解细胞，如用注射器反复抽压或用 Dounce 匀浆机匀浆。
变性裂解液 / 用于不容于去垢剂的抗原的裂解液
• 1% 十二烷基硫酸钠
• 5mM 乙二胺四乙酸
使用前加入：
• 10mM 的二硫苏糖醇或β- 巯基乙醇
• 蛋白酶抑制剂
• 15U/ml DNA 酶 I
仅识别变性蛋白的抗体不会与天然型蛋白结合。在收集和裂解细胞时，要将重悬细胞的变性裂解缓冲液加热。此方法也可用于非 离子型去垢剂无法提取的抗原。使用 DNA 酶 I 有助于从染色质中抽提蛋白。
电泳和印迹缓冲液
Laemmli 2 倍缓冲液 / 上样缓冲液
• 4% 十二烷基硫酸钠
• 10% 2- 巯基乙醇
• 20% 甘油
• 0.004% 溴酚蓝
• 0.125M 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢 测定 pH 值，调整 pH 值至 6.8
电泳缓冲液
• 25mM 三羟甲基氨基甲烷碱
• 190mM 甘氨酸
• 0.1% 十二烷基硫酸钠
测定 pH 值，如有必要的话，调整 pH 值至 8.3
转移缓冲液（湿式）
• 25mM 三羟甲基氨基甲烷碱
• 190mM 甘氨酸
• 20% 甲醇
如有必要的话，pH 值应调节至 8.3
大于 80 kDa 的蛋白，建议十二烷基硫酸钠终浓度为 0.1%。
转移缓冲液（半干式）
• 48mM 三羟甲基氨基甲烷
• 39mM 甘氨酸
• 20% 甲醇
• 0.04% 十二烷基硫酸钠
封闭缓冲液
5% 牛奶或 BSA（牛血清白蛋白）
加入三乙醇胺 - 吐温缓冲液。充分混合后过滤。如不过滤会聚集成斑点，这种小暗点会在显色时影响印迹的效果。
3. 免疫组化 / 免疫细胞组化（IHC）
固定缓冲液
福尔马林（ 10% ，中性缓冲液）
• 3.7-4% 甲醛（37-40%）
• 33mM 磷酸二氢钠
• 46mM 磷酸氢二钠（无水）
多聚甲醛（4% ，中性缓冲液） 8% 的多聚甲醛
0.2M 磷酸盐缓冲液 (PBS) ，pH 值 7.4
• 53mM 磷酸二氢钠
• 154mM 磷酸氢二钠
8% 多聚甲醛溶液配制时应 60°C 加热搅拌（温度不要超过 60°C）。溶液达到 60°C 时多聚甲醛溶解，加入 500ml 0.2mM 磷酸盐 缓冲液，使 0.1mM 磷酸盐缓冲液中含 4% 多聚甲醛。小心滴加 1 当量的氢氧化钠溶液直至溶液澄清（每 500ml 滴加 1 至 2 滴； 如果仍未澄清，可继续滴加。或者，可在 1 至 2L 溶液中加入 2 粒固体氢氧化钠）。溶液变冷后过滤。
溶液的 pH 值应为 7.4。不要用酸或碱来调节 pH 值 ! 如需要调节，可另配制 0.2 M 溶液来调节，溶液可使用单碱或双碱的磷酸钠 配制（视实际情况而定）。
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多聚甲醛应新鲜配制。如 4°C 过夜保存，第二天使用固定效果不如当天配制的好。可以将多聚甲醛溶液 -20°C 冻存， 但为了结果的一致性，组织样本要么都用新鲜配制的多聚甲醛固定，要么都用新鲜融解的多聚甲醛固定。 |
Bouin 溶液（特别用于保存质地软、结构精细的组织，如脑组织）
• 75ml 苦味酸（饱和的）
• 25ml 甲醛 (37-40%)
• 5ml 冰乙酸
• 充分混合
抗原修复液
柠檬酸钠缓冲液 ，pH 值 6.0
• 10mM 柠檬酸钠（二水枸橼酸三钠）
• 0.05% 吐温 20
• 混合溶解枸橼酸钠，用 1N 盐酸调节 pH 值至 6.0。 加入吐温 20 并充分混合。
室温可保存 3 个月，置于 4°C 可保存更长时间。
三羟甲基氨基甲烷 - 乙二胺四乙酸缓冲液 ，pH 值 9.0
• 10mM 三羟甲基氨基甲烷碱
• 1mM 乙二胺四乙酸
• 0.05% 吐温 20
混合溶解，调节 pH 值至 9.0。加入吐温 20 并充分混合。 室温可保存 3 个月，置于 4°C 可保存更长时间。
含酶的抗原修改缓冲液： 胰蛋 白酶储液
0.5% 胰蛋白酶
蒸馏水融解后 -20°C 冻存。 氯化钙储存液 (1%)
1% 氯化钙
蒸馏水融解后 4°C 保存。 胰蛋 白酶工作液
• 0.05% 胰蛋白酶（用0.5% 胰蛋白酶储存液配制）
• 0.1% 氯化钙（用 1% 氯化钙储存液配制）
• 8ml 蒸馏水
蒸馏水融解，用 1M 氢氧化钠调节 pH 值至 7.8 4°C 可保存 3 个月，置于 -20°C 可保存更长时间
4. 酶联免疫吸附试验 (ELISA)
碳酸氢盐 / 碳酸盐包被缓冲液 (100mM) pH9.6
抗原或抗体应用包被缓冲液稀释，以使其固定在孔内：
• 29mM 碳酸钠
• 71mM 碳酸氢钠 封闭液：
常用的封闭试剂为 1% 牛血清白蛋白、血清、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶，用 PBS 溶解。 洗涤液：
常用 PBS 或含去垢剂（如体积百分数 0.05% 吐温 20）的三羟甲基氨基甲烷缓冲液 (pH 7.4) (TBST) 抗体稀释缓冲液：
一抗和二抗应用 1 倍的封闭液稀释，以减少非特异结合。
5. 流式细胞术
荧光激活细胞分类检测（FACS）缓冲液 / 抗体稀释缓冲液
• 10% 胎牛血清 • 1% 叠氮化纳 • 溶解于 PBS 中 细胞穿透液
0.1-1% 聚乙二醇辛基苯基醚 / 乙基苯基聚乙二醇
溶解于 PBS 中，也可用吐温 20，皂甙，洋地黄皂甙和 Leucoperm 等温和的细胞膜溶解物。使用浓度 0.5%，溶解于 PBS 中 固定液
0.01%-0.1% 多聚甲醛，溶解于 PBS 中
6. 免疫沉淀 (IP)
缓冲液配制方法见免疫印迹（western blot）部分 RIPA（放射性免疫测定）缓冲液
缓冲液配制方法见免疫印迹部分
7. 染色质免疫沉淀 (ChIP)
FA 裂解缓冲液
• 50mM 羟乙基哌嗪乙磺酸 - 氢氧化钾，pH 值 7.5
• 140mM 氯化钠
• 1mM 乙二胺四乙酸，pH 值 8.0
• 1% 的聚乙二醇辛基苯基醚
• 0.1% 的去氧胆酸钠
• 0.1% 十二烷基硫酸钠
• 蛋白酶抑制剂
RIPA（放射性免疫测定）缓冲液
• 50mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢，pH 值 8.0
• 150mM 氯化钠
• 2mM 乙二胺四乙酸，pH 值 8.0
• 1% 乙基苯基聚乙二醇
• 0.5% 去氧胆酸钠
• 0.1% 十二烷基硫酸钠
• 蛋白酶抑制剂
洗涤缓冲液
• 0.1% 十二烷基硫酸钠
• 1% 的聚乙二醇辛基苯基醚
• 2mM 的乙二胺四乙酸，pH 值 8.0
• 150mM 的氯化钠
• 20mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢，pH 值 8.0
末次洗涤缓冲液
• 0.1% 十二烷基硫酸钠
• 1% 聚乙二醇辛基苯基醚
• 2mM 乙二胺四乙酸，pH 值 8.0
• 500mM 氯化钠
• 20mM 三羟甲基氨基甲烷 - 氯化氢，pH 值 8.0
洗提缓冲液
• 1% 十二烷基硫酸钠
• 100mM 碳酸氢钠 蛋 白酶 K
用蒸馏水溶解，浓度为 20mg/ml ，-20°C 冻存。
